親和純化（也稱為親和色譜）被認(rèn)為是強(qiáng)大的方法 純化色譜 或從復(fù)雜的混合物（如粗細(xì)胞裂解物、細(xì)胞培養(yǎng)上清液或其他樣品）中富集感興趣的蛋白質(zhì)。 

雖然選擇性沉淀可能在某種程度上有助于分離不同類型的大分子，但大多數(shù)純化方法依賴于溶液中分子與固體、固定材料的物理或化學(xué)相互作用的差異來達(dá)到預(yù)期的結(jié)果。 

例如，在親和純化中，通過用與所需分子特異性結(jié)合的化學(xué)固定配體處理固體載體，將目標(biāo)分子與溶液中的其他組分分離。因此，當(dāng)復(fù)雜的混合物通過色譜柱時(shí)，目標(biāo)分子與配體結(jié)合，而溶液中的非結(jié)合組分則簡單地用適當(dāng)?shù)木彌_液沖洗掉。 

最后，改變緩沖條件以破壞配體和目標(biāo)分子之間的結(jié)合相互作用，并在此過程中洗脫高度純化的目標(biāo)分子。

親和純化功能非常強(qiáng)大，因?yàn)橥ㄟ^親和柱一次，可以將樣品純化一千倍以上。

親和純化的堅(jiān)實(shí)支撐

基本上，親和色譜中使用兩種類型的固體載體：多孔凝膠載體或樹脂和磁珠。但是，在本文中，我們將主要關(guān)注親和純化樹脂。

樹脂或凝膠載體通常是基于糖或丙烯酰胺的聚合物樹脂，在溶液中產(chǎn)生 直徑50-150μm的珠子。除了極其多孔之外，珠子還足夠大，允許生物分子在磁珠表面周圍以及通過和在珠子之間暢通無阻地移動(dòng)。此外，串珠形式也使實(shí)驗(yàn)室的工作更容易、更方便，因?yàn)樗鼈兛梢院苋菀椎胤峙湟园b任何尺寸的色譜柱。

此外，由于配體共價(jià)連接到珠狀聚合物的外表面和內(nèi)表面，因此允許樣品分子自由流動(dòng)通過固定配體的高表面積。

目前，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用交聯(lián)珠狀瓊脂糖進(jìn)行蛋白質(zhì)親和純化，因?yàn)樗侵亓α?、低壓程序和低速離心的理想選擇。珠狀瓊脂糖樹脂也可以進(jìn)行額外的交聯(lián)和化學(xué)硬化，以提高其承受高壓的能力，但要預(yù)先警告，這會(huì)顯著降低結(jié)合能力。

該基質(zhì)通常具有4%（CL-4B）和6%（CL-6B）密度，均具有培養(yǎng)基偶聯(lián)能力，適用于相同的應(yīng)用（蛋白質(zhì)印跡、高通量篩選、相互作用研究、突變分析、功能測定、結(jié)構(gòu)分析）。磁珠的尺寸通常在 45 至 165 μm 之間，它們都具有 0.35 MPa 的壓力限制。它們僅在排除限制方面有所不同（CL-4B 為 20，000 kDa，CL-6B 為 4，000 kDa）。

除瓊脂糖凝膠外，聚丙烯酰胺基樹脂也可用于柱親和色譜。雖然這兩種介質(zhì)都具有較低的非特異性結(jié)合特性，但聚丙烯酰胺基樹脂不易壓縮，可以承受中壓應(yīng)用。

G-Biosciences 提供廣泛的親和純化試劑盒和樹脂，以適應(yīng)各種應(yīng)用。這里有一些 例子 這可以幫助您解決親和純化挑戰(zhàn)。  

• 用于親和素-鏈霉親和素和中性粒蛋白純化的固定化生物素和亞胺生物素樹脂

• 鈣調(diào)蛋白樹脂用于純化鈣調(diào)蛋白結(jié)合蛋白 （CBP）

• 固定化對(duì)氨基苯基磷酸膽堿和更具成本效益的固定化O-磷酸乙醇胺用于C反應(yīng)蛋白純化

• GST 標(biāo)記或 His 標(biāo)記的蛋白質(zhì)純化試劑盒或樹脂

• 固定化肝素和凝集素，用于分離脂蛋白、生長激素、止血蛋白和其他生理標(biāo)志物

• 硫丙基樹脂 用于純化含蛋白質(zhì)的硫醇基團(tuán)。

G-Biosciences提供含大量用于純化蛋白質(zhì)、核酸和其他生物分子的樹脂和磁珠。 幾種樹脂通常用于在純化過程中去除干擾劑。 該手冊首先介紹了預(yù)活化的樹脂，以便研究人員可以通過各種基團(tuán)偶聯(lián)蛋白質(zhì)和其他生物分子。接下來的部分是用于純化特定標(biāo)簽和基序的樹脂，包括6X組氨酸、生物素等。 主要色譜樹脂包括用于離子交換色譜和體積排阻色譜的樹脂。 最后，大量樹脂旨在去除常見的有問題的化學(xué)物質(zhì)和生物分子，包括洗滌劑、內(nèi)毒素等。

《純化樹脂手冊》包括以下部分：

• 親和純化樹脂
  

• 用于偶聯(lián)巰基、胺、羧基、碳水化合物和活性氫的預(yù)活化樹脂

• 親和素和鏈霉親和素純化樹脂
  

• 固定化生物素和低親和力的伊尼博汀

• 用于純化生物素和生物素標(biāo)記分子的樹脂

• 固定化親和素和單體親和素以及低親和力鏈霉親和素

• 用于CBP標(biāo)簽的鈣調(diào)蛋白樹脂

• C-反應(yīng)蛋白純化樹脂

• GST標(biāo)記的蛋白質(zhì)純化

• 用于酵母和細(xì)菌重組蛋白的谷胱甘肽樹脂和蛋白質(zhì)純化試劑盒

• 組氨酸標(biāo)記蛋白純化

• IDA 和 NTA 樹脂、色譜柱、板和磁珠

• 提供鎳、鈷、銅和鋅版本

• 固定化肝素

• 用于碳水化合物分離的固定化凝集素

• 凝集素純化樹脂

• 核酸純化樹脂

• 固定化硼酸和二氧化硅磁珠

• 蛋白酶純化樹脂

• 抗體純化樹脂

• 蛋白 A、蛋白 G 和蛋白 A/G 樹脂和色譜柱

• IgA純化樹脂

• 親硫吸附

• 凝膠過濾/體積排阻色譜

• 疏水作用色譜

• 離子交換色譜

• 陰陽離子交換器

• 除污樹脂

• 去污樹脂

• 內(nèi)毒素去除樹脂

• 脫鹽和緩沖液交換離心柱

• 還原劑樹脂，包括TCEP

• 去除白蛋白

• 多種一次性色譜柱可供選擇